Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者的发展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现显现口内自身突变到显现显现1型式乳癌病理疼痛的重大突破亲率在成年人时期就有很好的所述，多个口内自身突变中性的成年人记事70%在血液叠加后10年内肺结核乳癌，而随访15年的成年人这一%-减低到84%。值得注意，占病理1型式乳癌一半以上的型式1型式乳癌的病症组态还并未得到充分的科学研究。

越来越多的人开始适用有系统系统来定义1型式乳癌的重大突破：个棒状在显现显现多种口内自身突变时离开第1阶段，显现显现血糖异常时离开第2阶段，显现显现疼痛时离开第3阶段。一些多发口内自身突变中性的个棒状，在1期和2期，重大突破较极快，并发展为病症的1型式乳癌。我们之前所述了一四组在首次检测到多种口内自身突变样本后至少10年无乳癌的较快重大突破者，这四组病症数目少，但基本上特征相当明确。随后，我们找到口内自身复合物特异性CD8+T细胞核催化在重大突破快速的病症中的基本上不普遍存在，但在近期病症和长期普遍存在的乳癌病症中的很容易检测到。这也许表明，与重大突破病症来得，这些病症自身突变的恒定增强。

早期科学研究表明，尽管恒定性T细胞核(Treg)数量正常，但乳癌病症普遍存在一些组态缺陷，其中的之外对IL-2的催化能力增加。此外，乳癌病症中的的效应以CD4+T细胞核也许对恒定更具抵抗性，表现为效应以T细胞核的抑止减弱，自然产生的Treg和人棒状内产生的诱导Treg，以及复合物漫长的CD4+T细胞核中的IL-2催化减弱。本科学研究的借以是所述了CD4+恒定性T细胞核(Treg)在这群人极快速重大突破者中的的基本上特征，他们的年长为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群系统化的纵向科学研究，在21岁以下确诊的病症子女中的检查1型式乳癌的危险状况。我们之前所述了长期快速重大突破者的基本上特征，他们保持良好多重口内自身突变中性多达10年，但并未显现显现乳癌的病理疼痛，极快性或非同步进行性自身免疫。随后，10名继续保持良好无乳癌并愿意提供大量血液样本的快速重大突破者纳入T和B细胞核组态量化。在目前的科学研究中的，8名极快重大突破者(SP四组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身突变中性。所有的发起者都处于1型式乳癌重大突破的1期，尽管一些人随后失去了口内自身突变对某些复合物的抽血，然而，一名病症已经处于2期至少6年，但并未显现显现病理疼痛，一名病症被诊断为乳癌，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据量化中的对该供棒状同步进行了单独评估。分离外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多参数流式细胞核心法和T细胞核抑止试验评估供棒状中的Treg的频亲率、表现型式和组态。适用FlowSOM和CITRUS(聚类确认、表征和回归)同步进行无监督聚类量化，评估Treg表现型式。

结果：与肥胖症供棒状来得，来自极快重大突破棒状的清醒CD4+T细胞核的监督聚类显示，激光阴的清醒CD4+ Treg频亲率减低，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)解读减低有关。一名HbA1c增高的病症与重大突破快速者和给定的小鼠来得，Treg谱有所各有不同。组态量化表明，与肥胖症供棒状来得，来自快速重大突破棒状的Treg激活的CD4+效应以T细胞核抑止明显受损。表现为对效应以CD4+T细胞核CD25和CD134解读的抑止减低。

布1 有系统的表现型式量化显示，CD4+Treg亚型式在极快重大突破配置文件中的减低。由FlowSOM作用于的Treg二楼，聚集在来自所有供棒状的光阴CD4+CD45RA -细胞核上。根据标示出物解读确认显现出10个元簇:清醒T细胞核_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞核;HLA-DR + GITR +清醒T细胞核;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)适用9个各有不同Treg标示出作用于的10个元簇的MST。每个节点都是一个集群(100个集群)，更多的元集群(10个元集群)在节点四组一处上色。每个节点中的的煎饼布暗示单个标示出的解读级别。(b)每个元聚类的热布，以显示总棒状标示出解读。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)作用于布，以及FlowSOM标记的每个元簇的裂口。(e-l)相对丰度为每个metacluster箱内等分(丰度> 0.05%)确定为HD和SP四组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞核(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞核(l)。浅白色红色都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查和。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 适用CITRUS的预测模型式证实，Treg频亲率的减低是重大突破快速的标志。分级依赖型(a - f)和柑橘量化(g-k)更为SP发起者和给定的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的都是性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR解读同步进行分离，模拟FlowSOM群棒状。(b) HD(环纹)和SP(黑纹)四组以及供棒状SP 606(浅白色)中的CD25+ cd127的频亲率概述布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型同构的箱内等分;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度着色，箭头突显现出的簇被标记为SP和HD配置文件之间的各有不同。(j)箱内等分显示了在SP(黑纹)和HD(灰点)四组中的，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对丰度(%-)。(k)直方布显示每个簇的表现型式(粉红色)和Treg标示出相对解读与历史背景解读(白色);上列，闪存Treg_3;上面偷偷地，闪存Treg_4。历史背景与所有其他簇中的标示出的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查和

布3 与肥胖症献血者来得，重大突破快速者清醒treg的GITR减低。每个清醒CD4+T细胞核元簇(清醒T细胞核_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞核;HLA-DR + GITR +清醒T细胞核;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个解读标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的解读热布(sp606不之外在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中的所有HD(棕色)、所有SP(白色)和SP 606(浅白色)的FlowSOM GITR解读接在，显示直方布(c)和概述布(d)。Wilcoxon配对符号秩和检查和，p< 0.07(浅白色)所有供棒状之外，p< 0.05(白色)供棒状SP 606和给定的HD不之外在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR解读，从分级依赖型，从所有HD(棕色)、所有SP(白色)和SP 606(浅白色)接在，显示直方布(e)和概述布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检查和

布4 来自快速重大突破的CD4+ treg细胞核控制效应以CD4+T细胞核的能力增加。SP四组用白色的线和红色暗示，HD四组用白色的线和红色暗示，浅白色的线/红色暗示供棒状sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核同步进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标示出为CFSE, Treg按观察的%-硫酸铜。用抗CD3 /28微珠光阴化细胞核，人才培养3天后同步进行流式细胞核心法检测。(a-d)与CD4+需要的话者相对应以的treg人才培养(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止%-。适用中性对照(激光阴的响应以细胞核不含treg)推算抑止%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

布5 效应以CD4+T细胞核对快速重大突破的T细胞核光阴化的抑止更引人注意。SP四组用白色的线和红色暗示，HD四组用白色的线和红色暗示，浅白色的线/红色暗示供棒状sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核同步进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标示出，treg按观察的%-硫酸铜。用抗CD3 /28微珠光阴化细胞核，人才培养3天后同步进行流式细胞核心法(CD25反染)和细胞核因子量化。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者协力人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止百分亲率(b)。(c,d) CD25抑止百分亲率(c)和CD134抑止百分亲率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中的的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

假设：我们得显现出的假设是，来自快速重大突破子的光阴化清醒CD4+Treg在GITR解读中的得到了扩展和多样化，强调了进一步科学研究Treg在1型式乳癌风险个棒状中的的异质性的必要性。

原文注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28